什么是mIHC本事?黄色片
mIHC（Multiplex immunohistochemistry，多重免疫组化）是一项基于酪胺信号放大的多重抗体荧光象征本事，不错在细胞或组织样本原位上检测多个目的靶点，通过这些靶点的组合和位置联系的参议，进而推崇其相互作用的机理。
mIHC的本事上风
现在，多种参议技能在描摹肿瘤微环境中阐述作用:
流式细胞术约略筛选分析多种细胞型组分，却无法得知细胞的步地与空间位置信息；
免疫组化约略直不雅象征某个卵白的散播与抒发，探讨词象征数目有限；通过连续切片本事固然可终了多标，然则存在一定的邪恶，非委果酷爱上的单细胞多标;
多重免疫组化（mIHC）本事在肿瘤微环境分析中具有专有上风，约略冲破成例免疫荧光抗体种属终结，可终了在一张切片终了多个靶标的象征，并能对细胞的表型，细胞间的原位空间信息，肿瘤微环境的生态群进行精确定量分析。
芯超mIHC使用的本事平台及本事旨趣
mIHC本事经由
01
TSA本事组织多重染色
使用多重荧光免疫组化染色试剂盒，在石蜡包埋的组织切片上对切片进行TSA酪胺信号放大本事，摄取HRP象征的二抗，HRP催化加入体系的荧光素底物，生成活化荧光底物，活化底物可与抗原上的酪氨酸共价说合，使样品上踏实地共价说合荧光素。之后用热拓荒洗去非共价说合的抗体，幸免交叉响应，如斯走动终了多重荧光象征。
TSA酪胺信号放大本事
02
全景连续光谱扫描
使用TissueFAXS Spectra系统进行连续全光谱高倍率成像，该显微镜通过全辐射光谱，每10nm记载一次图像，这将允许7种不同的荧光团同期拿获到一张合成图像中（A），然后不错将其光谱进行拆分红6个孤苦的图像，每个图像代表一个荧光团（C-H）和核染色DAPI （B）。
芯超 - 全景连续光谱扫描及光谱拆分
03
单细胞表型量化分析
将TissueFAXS得回的图像导入StrataQuest定量分析系统对图像进行单细胞分辨率数据分析。
3.1 细胞核识别
通过DAPI核染色进行细胞识别，不错准确区分每个细胞的细胞核、细胞质和细胞膜，同期字据细胞核荧光强度（纵坐标）与面积（横坐标）作图，设门圈选有用细胞核（红色象征），确保仅测量细胞，排斥细胞碎屑。
芯超 - 细胞识别
3.2 抗体信号识别
以抗体Foxp3荧光信号识别分析为例形容信号识别过程：抗体Foxp3单通说念信号，抗体Foxp3（黄色）+ DAPI(蓝色）；以有用细胞核为中枢，字据抗体Foxp3染色情况设定距离半径，寻找细胞核中的卵白荧光信号；以抗体Foxp3荧光强度（纵坐标）与面积（横坐标）作图，设阈值分手出阳性细胞（红色象征），UR行数据为Foxp3抗体信号阳性细胞数目及百分比。
芯超 - 抗体信号识别图
抗体PDL1抗体panCK双阳性细胞识别为例。以有用单细胞为基础，抗体F（PD-L1，绿色）荧光强度（横坐标）抗体A（panCK， 紫色）荧光强度（纵坐标）作图，得到PDL1+CK+细胞。
芯超 - 双荧光信号细胞识别
3.4 组织拆分以上皮开端肿瘤为例，以CK阳性信号识别拆分以分离基质和上皮肿瘤组织区域。
芯超 - 组织拆分图
04
空间结构量化分析
欺诈TissueFAXS Cytometry本事终了从单细胞、细胞群、组织结构及至器官级别的多模态，跨圭臬的空间联系量化分析参议。
比如可在参议肿瘤微环境主义通过空间数据挖掘蔓延至肿瘤亚微环境，进一步细化对肿瘤亚微环境中多种象征细胞与单细胞或细胞群体之间、单细胞与肿瘤组织之间、特定细胞群体与肿瘤组织之间，肿瘤组织与血管之间等复杂的相互作用联系，进而繁衍出更为丰富社会学联系，挖掘以细胞社区为功能单元的科学信息，为解释疾病的发生发展提供蹙迫的数据开端。
芯超 - 空间结构量化分析
以上即是芯超好意思满的mIHC施行经由，看完这些，您是不是对多重免疫组化有了初步的了解？同期列位确认注解可能也有了更多的疑问，比如以下这些：
mIHC不错应用于哪些场景？我该若何将mIHC应用于我的课题中？
我思作念多重免疫组化来参议肿瘤免疫微环境，我该若何去找目的细胞类型对应的marker?
选好了多重免疫组化的marker，我该若何挑选适用于mIHC施行的抗体？
我思同期象征卓越10种卵白，不错终了吗？有什么好的处理决议？
得到了多个靶标在组织中的散播和定量情况，我该若何进行分析，材干将这些施行数据转动成有酷爱的参议效果？
不要心焦，您的疑问芯超会逐个为您解答，接待样貌本公众号黄色片，之后的几期，小编会围绕以上这些问题再背面几期分别伸开解析，敬请期待！